Реальная тара может отличаться от изображённой на фотографии

Протеиназа K

Name: Протеиназа K
SKU: CAS-39450-01-6

Нет в наличии

Протеиназа K (EC 3.4.21.64, CAS 39450-01-6) — широкоспектральная сериновая эндопротеаза, выделенная из гриба Конкорд Текнолоджи. Лиофилизованный порошок HB с активностью ≥30 единиц на мг белка расщепляет белки и инактивирует ДНКазу и РНКазу при подготовке нуклеиновых кислот. Сохраняет активность в присутствии 0,1–1% SDS, мочевины и широкого диапазона pH 4–12,5. Оптимальная температура инкубации 50–65 °C; инактивация при 95 °C 10 мин или фенольной экстракции. Хранить при −20 °C в сухом виде.

Категории: Лабораторные реактивы и аналитика, Фармацевтическое и биохимическое сырьё

Основные применения

Выделение геномной, плазмидной и высокомолекулярной ДНК/РНК
Инактивация нуклеаз в лизатах клеток и тканей
Дайджестия белков в присутствии денатурирующих агентов

Стандарты и документы

Спецификация ≥30 Ед/мг; COA партии.

Характеристики

CAS: 39450-01-6
Формула: EC 3.4.21.64
Молярная масса: 28,9 кДа
Класс вещества: Сериновая протеаза
Внешний вид: Белый или светло-бежевый лиофилизат
Температура хранения: −20 °C, сухо

Применение по отраслям

Подготовка нуклеиновых кислот

QIAGEN: протеиназа K расщепляет пептидные связи у карбоксильной группы алифатических и ароматических аминокислот; типичная концентрация 50–200 мкг/мл при pH 7,5–8,5 и 37–55 °C. Панреак: при 0,5–1% SDS фермент сохраняет активность и переваривает нуклеазы без повреждения ДНК. Рекомендуемая инкубация 30 мин – 18 ч.

Лизис тканей и обогащение PrPSc

Sigma P6556: применяют для обогащения PrPSc при исследовании TSE, протеолитического футпринтинга белков и предгибридизации эмбрионов. Фермент относится к семейству субтилизинов с каталитической триадой Asp39-His69-Ser224.

Практические нюансы

QIAGEN сравнение форматов

Порошок: ≥30 Ед/мг лиофилизата, ≤10 пг/мг ДНК. Раствор 20 мг/мл: ≥800 Ед/мл, ≤200 пг/мл ДНК. Панреак порошок: ≥35 Ед/мг, ≤0,1 пг/мг ДНК.

Протокол лизиса ткани

Типично: 50–100 мкг/мл протеиназы K, 0,5% SDS, 5 mM EDTA, pH 7,5–8,0, 50–56 °C 1–3 ч. Для костной ткани и парафиновых срезов время увеличивают до 12–18 ч.

Стабильность в денатурирующих условиях

Панреак: активность сохраняется при 0,5–1% SDS и 1–4 M мочевины; Ca²⁺ 1–5 мкмоль повышает термостабильность. Фермент переваривает нативные белки, инактивируя ДНКазу без отдельной денатурации.

Хранение и безопасность

Условия хранения: −20 °C, сухое место, герметичная тара.
Меры безопасности: Избегать вдыхания порошка; перчатки при взвешивании.
Перевозка: Негорючий фермент; стандартная лабораторная логистика.
Вентиляция: Общая вентиляция при работе с порошком.
Температурный режим: −20…+4 °C
Тара: Пластиковые флаконы с осушителем.

Частые вопросы

Как приготовить раствор 20 мг/мл

QIAGEN рекомендует 50 mM -HCl pH 7,5–8,0 с 1–5 mM Ca²⁺ для немедленного использования или 10 mM с 50% глицерином для длительного хранения при −20 °C.

При какой температуре инкубировать

Рабочий диапазон 20–65 °C; оптимум 50–56 °C. Повышение температуры с 37 до 50–60 °C увеличивает активность в несколько раз по Панреак.

Инактивируется ли при 95 °C

QIAGEN указывает, что полная термоинаактивация невозможна даже при 95 °C 10 мин; в наборах фермент удаляется промывками на колонках.

Работает ли в присутствии EDTA

Да, хелаторы не ингибируют протеиназу K, в отличие от некоторых металлозависимых протеаз. Ca²⁺ стабилизирует фермент, но не обязателен для активности.

Чем отличается HB grade от ультрачистого

HB — стандартный биохимический grade ≥30 Ед/мг. Ультрачистые варианты (QIAGEN Панреак ) имеют ≤0,1 пг/мг остаточной ДНК для чувствительных NGS-приложений.

Как хранить открытый флакон

При −20 °C в сухом месте; избегать циклов оттаивания. Готовый раствор с глицерином стабилен при −20 °C несколько месяцев. Технолог фиксирует результаты входного контроля в журнале приёмки.